Thermo Scientific™ Solution de DNase I (1 unité/μl), exempte de RNase

Description

La désoxyribonucléase I (DNase I) est un polypeptide glycosylé unique qui dégrade l’ADN simple et double brin indésirable. L’enzyme fonctionne en clivant l’ADN en fragments 5' phosphodinucléotides et en petits fragments oligonucléotidiques. La DNase I est communément ajoutée aux réactifs de lyse cellulaire afin d’éliminer la viscosité provoquée par le contenu en ADN des lysats cellulaires bactériens ou pour éliminer les modèles d’ADN des ARN produits par une transcription in vitro. Deux qualités de DNase sont proposées : l’une qui est suffisante pour le travail sur les protéines et l’autre qui est utile pour toute application nécessitant une digestion de l’ADN, où il est essentiel d’éviter d’endommager l’ARN.

Points clés :

• Dégrade et élimine l'ADN indésirable présent dans les échantillons
• Clive l'ADN simple brin et double brin
• Compatible avec les réactifs de lyse cellulaire Thermo Scientific Pierce
• Réduit la viscosité des lysats bactériens (extraits protéiques) afin de faciliter le pipetage
• Fournie sous forme de stocks de glycérol à 50 % dans 10 mM de Tris-HCl de pH 7,5, 10 mM de CaCl₂ et 10 mM de MgCl₂
• Disponible en deux formats pratiques : Testé à la RNase pour protéger l’ARN (N° Réf. 89836) et grade d’extraction protéique pratique (N° Réf. 90083)

• Les ions calcium sont requis pour l’activité de la DNAse I et des quantités traces de Ca++ peuvent être présentes à des concentrations suffisamment élevées pour que la DNase I soit active ; en revanche, l’utilisation d’EGTA ou de tampons exempts de calcium peut réduire l’activité de la DNase I à des taux indétectables.
• Des taux élevés (c’est-à-dire, 100 mM) d’ions monovalents comme Na+ et K+ réduiront l’activité de la DNase I
• La DNase I est inactivée par un chauffage à 65°C pendant 10 minutes
• Unité Kunitz : 1 unité Kunitz est la quantité d’enzymes requise pour provoquer une augmentation de l’absorbance à 260 nm de 0,001 / min / ml à 25°C dans du NaOAc 0,1 M, pH 5,0, due à la dégradation d’ADN fortement polymérisé
• Unités d’analyse de dégradation : 1 unité est définie comme la quantité d’enzymes qui est requise pour totalement dégrader 1 mg d’ADN plasmidique en 10 minutes à 37°C dans du Tris-HCl 10 mM pH 7,5, MgCl₂ 50 mM, CaCl₂ 13 mM

• Aspect visuel : Liquide transparent
• Concentration : 1 unité / ml
• Activité : ≥ 100 000 unités / mg de protéine
• Contamination par la RNase : 20 unités libèrent < 2 % non précipitable à l’éthanol lors d’une incubation avec de l’ARN poly(A) marqué par H3
• Analyse fonctionnelle : 1 μl d’enzyme dégrade < 5 % de l’ARN, mais dégrade 100 % de l’ADN

• Aspect visuel : Liquide transparent et incolore exempt de matières insolubles
• Unités : ≥ 2 500 unités / ml
• Définition d’une unité : 1 unité est définie comme la quantité d’enzyme requise pour produire une augmentation de l’absorbance à 260 nm de 0,001 / min / ml à 25°C pour de l’ADN fortement polymérisé

• Élimination de la viscosité provoquée par l'ADN dans les lysats cellulaires protéiques
• Élimination des matrices d'ADN des ARN produits par une transcription in vitro