Thermo Scientific™ EZ-Link™ Desthiobiotinylation and Pull-Down Kit

Description

Le kit de desthiobiotinylation et d’extraction Thermo Scientific EZ-Link est un ensemble complet de réactifs pour les protéines purifiées du marqueur de biotine et les utilise pour purifier les complexes d’interaction à l’aide de la résine d’agarose streptavidine avec des conditions d’élution douces.

Ce kit de marquage et de purification tout-en-un utilise la sulfo-NHS-LC-desthiobiotine, un réactif ester NHS réactif aux amines, pour marquer efficacement un échantillon de protéines purifiées ou mélangées à des fins d’appât dans la capture et la purification d’interactions protéiques. Les marqueurs de la desthiobiotine des protéines marquées se lient à la streptavidine avec une spécificité élevée tout en éluant facilement dans des conditions très douces (c’est-à-dire par déplacement compétitif avec de la biotine stable et libre). Le système permet la capture et l’isolement efficaces, mais doux, (extraction) de complexes d’interaction protéique spécifiques à partir de lysats cellulaires à l’aide de microbilles d’agarose de streptavidine. Le kit complet comprend des flacons de 1 mg prêts à l’emploi de réactif de desthiobiotinylation, des colonnes de dessalage pour traiter les protéines marquées et de l’agarose de streptavidine à haute capacité avec des tampons pour effectuer facilement plusieurs expériences de dosage d’extraction à l’échelle de la microcentrifugeuse. Identifiez de nouvelles interactions entre une protéine connue (appât) et une cible (proie) non découverte antérieurement, ou confirmez les interactions entre les protéines connues d’appât et de proie.

Points clés :

• Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotine : marquez les protéines avec un équivalent de la biotine qui se lie spécifiquement à la streptavidine, mais aussi s’élue facilement avec des conditions douces
• Dosage d’extraction : protocole et réactifs simples et optimisés pour marquer les protéines et récupérer (purifier) des complexes d’interaction protéique intacts et fonctionnels
• Kit complet : comprend le marquage des colonnes de réactif et de dessalage pour préparer les protéines d’appât, ainsi que l’agarose de streptavidine et le tampon d’élution pour effectuer une extraction

Détails du produit :
La desthiobiotine est un analogue de la biotine sans soufre à anneau unique qui se lie à la streptavidine avec une spécificité presque égale, mais moins d’affinité que la biotine (1 / Kd = 10^11 vs 10^15 M, respectivement) [1-2]. Par conséquent, les protéines d’appât déthiobiotinylées et leurs partenaires en interaction peuvent être facilement et spécifiquement éluées de la résine d’affinité de streptavidine en utilisant des conditions douces basées sur un déplacement compétitif avec la biotine libre. Pour les expériences de dosage par extraction avec des échantillons biologiques, cette caractéristique de libération douce de la desthiobiotine permet également de minimiser la co-purification de molécules biotinylées endogènes, qui restent liées à la streptavidine lors de l’élution des complexes protéiques cibles avec la biotine libre. Le système d’affinité avidine-biotine modifié élimine également la nécessité d’utiliser des conditions d’élution difficiles qui peuvent dissocier des complexes et/ou endommager la protéine ou la cellule cible. Les techniques basées sur la desthiobiotine sont idéales lorsque vous utilisez des protéines natives ou recombinantes qui ne sont pas exprimées avec une étiquette de fusion et lorsque vous isolez des protéines capturées dans des conditions natives, telles que le ciblage de cellules intactes ou de protéines de surface cellulaire.
La sulfo-NHS-LC-Desthiobiotine est une variante de la biotine qui est activée comme ester sulfo-NHS avec un bras espaceur à longue chaîne (LC) pour marquer de façon covalente les amines primaires (-NH2) des protéines ou d’autres molécules avec des groupes de desthiobiotine. Le format No-Weigh (flacons refermables de 1 mg) élimine les difficultés associées à la pesée de petites quantités de réactif et optimise la protection du réactif inutilisé contre l’hydrolyse.