Thermo Scientific™ ADN ligase T4 (5 U/μl)

Description

Catalysez la formation d’une liaison phosphodiester entre une extrémité 5’-phosphate et une extrémité 3’-hydroxyle juxtaposées dans des molécules d’ADN ou d’ARN double brin avec de l’ADN ligase T4 Thermo Scientific™. L’enzyme répare les cassures des souches premier brin d’ADN, d’ARN en duplex, ou d’ADN / ARN hybrides. Elle permet également de joindre les fragments d’ADN soit avec des terminaux cohésifs ou émoussés, mais n’a pas d’activité sur les acides nucléiques premier brin.

L’ADN ligase T4 nécessite la présence d’ ATP  comme cofacteur.

Points clés

• Actif dans les enzymes de restriction Thermo Scientific, la PCR et les tampons de RT (lorsqu’il est supplémenté avec de l’ATP)
• La ligature –rapide de l’extrémité collante est réalisée en 10  minutes à température ambiante
• Fournie avec une solution de PEG pour la ligature efficace de l’extrémité émoussée

Applications

• Clonage des fragments d’ADN générés par l’enzyme de restriction
• Clonage des produits de PCR
• Raccordement des liens d’oligonucléotides bicaténaires ou des adaptateurs à l’ADN
• Mutagenèse dirigée
• Polymorphisme de longueur des fragments amplifiés (AFLP)
• Détection d’ARN ligase (voir  Référence 3)
• Réparation des entailles d’ADN, ARN duplex ou d’ADN / ARN hybrides
• Auto-circularisation de l’ADN linéaire.

Remarques

• La fixation de l’ADN ligase T4 aux fragments d’ADN peut retarder leur migration en gel d’agarose. Afin d’éviter cela, incubez les échantillons avec  une solution de 6X colorants de &charge d’ADN et SDS  à 70°C pour 5 min ou à 65°C pour 10 minutes et refroidissez-les sur de la glace avant l’électrophorèse.
• Le volume de mélange de réaction de ligature ne doit pas dépasser 10 % du volume de cellules compétentes utilisé pour le processus de transformation.
• Avant l’électro-transformation, éliminer l’ADN ligase T4 du mélange de ligation à l’aide d’une colonne à centrifuger ou par une extraction au chloroforme. L’ADN extrait peut être ensuite précipité avec de l’éthanol.