Invitrogen™ pHrodo™ Dyes for Amine Labeling

Description

Réalisez des études d’internalisation cellulaire avec un signal-fond faible et une spécificité élevée à l’aide des colorants de capteur de pH pHrodo, y compris les colorants pHrodo rouge, vert et rouge profond. Ces colorants peuvent être conjugués à des biomolécules telles que des anticorps et ne deviennent hautement fluorescents que dans des environnements acides, tels que ceux des lysosomes et des endosomes cellulaires. Ceci permet la détection de la biomolécule conjuguée dans le dosage pour cellules vivantes sans avoir besoin d’étapes de lavage ou de colorants absorbeurs dans le flux de travail expérimental.

Colorants pHrodo rouge, vert et rouge profond
Les colorants pHrodo rouge, vert et rouge profond réactifs aux amines sont optimisés pour la création de bioconjugués utilisés dans l’étude de l’internalisation des anticorps, de l’endocytose et de la phagocytose dans les dosages de cellules vivantes. Les colorants pHrodo réactifs à l’amine permettent de marquer les amines primaires sur un anticorps, une protéine, une cellule, un virus ou un autre biomolécule contenant de l’amine pour créer un conjugué qui devient fluorescent à l’intérieur d’environnements acides, mais qui n’affiche que peu ou pas de signal à pH neutre. L’absence de fluorescence des colorants pHrodo dans un environnement extracellulaire typique élimine le besoin d’étapes de lavage ou de colorants de désactivateur dans le flux de travail expérimental.

Colorants d’ester STP pHrodo iFL rouge et vert
Les colorants d’ester STP pHrodo IFL rouge et vert sont des versions améliorées des colorants pHrodo rouge et vert d’origine, ils sont optimisés pour créer des conjugués plus solubles que les colorants d’origine. Cette propriété améliorée les rend utiles pour le marquage des anticorps qui peuvent autrement s’extraire hors de la solution pendant la conjugaison.

Ester TFP pHrodo rouge profond
L’ester TFP pHrodo rouge profond est distinct des colorants d’ester rouge et vert pHrodo IFL :le pKa est inférieur et, par conséquent, affiche des rapports signal-fond améliorés et devient ultérieurement fluorescent dans la voie endocytaire. Notre colorant à faible fond pHrodo rouge profond facilite plus que jamais l’étude de l’internalisation avec une plus grande certitude de résultats et moins d’optimisation car le colorant pHrodo rouge profond ne devient fluorescent que dans l’endosome et le lysosome tardifs.

Caractéristiques et avantages des colorants pHrodo pour le marquage des amines

• Personnalisation—utilise des colorants pHrodo sensibles au pH pour faire des bioconjugués sensibles au pH de votre choix
• Vitesse et précision—obtenez des résultats plus rapides et plus précis qu’avec tout autre dosage d’endocytose ou de phagocytose, aucun besoin d’étapes de lavage ou d’absorbeurs
• Multiplexage—multiplex avec marqueurs fluorescents verts ou rouges tels que GFP ou RFP avec trois choix de couleurs différents
• Fenêtre de signal supérieure—avec le fond minimal du colorant pHrodo rouge profond à un pH neutre, le rapport signal/bruit maximal est activé pour la certitude des résultats
• Faible pKa—le colorant pHrodo rouge profond élimine le signal non spécifique provenant d’un cargo non internalisé, résultant en une fluorescence uniquement dans les endosomes et les lysosomes tardifs

L’augmentation de la fluorescence des colorants pHrodo et de l’acidification du pH, est corrélée avec l’acidification des vésicules intracellulaires : ces colorants sont ainsi de précieux outils pour l’étude de l’endocytose ou de la phagocytose et leur régulation par des facteurs environnementaux, des médicaments ou des pathogènes. Les propriétés spectrales des colorants pHrodo les rendent utiles pour les expériences multi-couleurs. Les colorants pHrodo IFL rouge, iFL vert et rouge profond peuvent être détectés à l’aide de la plupart des ensembles de filtres fluorescents rouges standard, vert et rouge profond. Les conjugués de colorant pHrodo ont été validés pour une utilisation dans une variété d’applications, y compris la cytométrie en flux, la microscopie fluorescente et le criblage à haut contenu (HCS).

Le colorant pHrodo rouge profond possède un pKa inférieur par conception et n’affiche aucun signal dans des conditions neutres, devenant fluorescent uniquement dans des environnements acides. Cette propriété unique permet le développement rapide de dosages et la certitude des résultats lors de l’étude de l’internalisation des anticorps et des voies endocytiques/phagocytiques. Le colorant pHrodo rouge profond permet une meilleure discrimination du cargo internalisé de l’extérieur de la cellule, alors que le colorant pHrodo IFL rouge et vert devient fluorescent dans l’endosome précoce.