Invitrogen™ Phospha-Light™ SEAP Reporter Gene Assay System

Description

• La détection d’un rapporteur sécrété permet d’analyser sans détruire les cellules précieuses
• Une large gamme dynamique de dosages de phosphatase alcaline permet à l’utilisateur de mesurer le niveau d’enzyme avec précision du femtogramme à la gamme de nanogrammes
• La sensibilité du dosage est de 100 à 1 000 fois meilleure qu’avec les dosages isotopiques/non isotopiques pour la chloramphénicol acétyl transférase (CAT) ou aux dosages colorimétriques/par fluorescence pour la b-galactosidase, ce qui offre une plus grande sensibilité que les dosages concurrents
• Un dosage hautement sensible avec une large gamme dynamique permet de détecter des niveaux élevés et bas de rapporteur sans avoir à réaliser de nombreuses dilutions d’échantillon
• Le kit de dosage des gènes rapporteurs non radioactif élimine les problèmes d’utilisation de radio-isotopes
• Le dosage peut être effectué en une heure environ, fournissant un délai d’exécution rapide du dosage

Surveiller l’expression au fil du temps
Le système de dosage Phospha-Light permet la détection sensible de la protéine rapporteur de phosphatase alcaline sécrétée (SEAP) dans les milieux de culture cellulaire. Le produit génétique SEAP est une forme tronquée de phosphatase alcaline placentaire humaine. Une protéine rapporteur sécrétée élimine la nécessité de préparer des extraits cellulaires. Une population de cellules peut être surveillée au fil du temps et reste intacte pour d’autres expériences.

Réactifs exclusifs pour une détection ultrasensible
Le système de dosage Phospha-Light est l’une des méthodes les plus simples et les plus rapides pour optimiser l’efficacité de la transfection. Une combinaison de réactifs exclusifs est essentielle pour la détection hautement sensible réalisable avec le dosage Phospha-Light. Le système est constitué de substrat de phosphatase alcaline haute performance CSPD™, d’un amplificateur de luminescence Emerald™ et d’un système tampon unique conçu pour inhiber spécifiquement l’activité de phosphatase alcaline endogène non placentaire. La lumière persistante du signal chimiluminescent permet l’utilisation de luminomètres sans avoir besoin d’injecteurs pour la mesure.

Applications
Le système de dosage de gènes par rapporteur Phospha-Light a été largement utilisé pour les dosages de gènes rapporteurs afin de mesurer l’expression génétique dans les lignées cellulaires établies et dans les cellules primaires transfectées, y compris comme une lecture de l’interférence de l’ARN/de l’extinction génétique. Le dosage du gène rapporteur Phospha-Light a été utilisé pour une grande variété de dosages fonctionnels viraux, notamment des dosages d’expression génétique virale, la réplication virale, la fusogénicité virale, la fusion cellule-cellule mediée par les virus et la neutralisation des virus ainsi que l’infectivité virale. L’utilisation de la protéine rapporteur SEAP est très favorable aux dosages de gènes rapporteurs in vivo, en dosant des échantillons de sérum provenant d’animaux transgéniques, transfectés ou infectés par un vecteur viral. Le système de dosage de gènes par rapporteur Phospha-Light a été utilisé pour mesurer les niveaux de SEAP dans les sérums provenant d’animaux entiers transfectés ou transgéniques, y compris la souris, le rat, le marmouset, les sérums de singe et de porc et dans le liquide allantoïque d’œuf de poule. La protéine SEAP de souris (mSEAP) a récemment été développée pour améliorer la stabilité des protéines SEAP chez les souris transgéniques et le système Phospha-Light a été utilisé pour la détection sensible de la mSEAP.

Spécifications

• Cellules compatibles : Cellules de mammifères
• Méthode de détection : Chimiluminescence
• À utiliser avec équipement : Luminomètre (microplaque)
• Forme : Liquide
• Format : Plaque de 96 puits
• Compatibilité avec le haut débit : Compatible avec le haut débit
• Affichage : Point final
• Type d’échantillon (spécifique) : Cultures cellulaires
• Substrat : CSPD™
• Propriétés du substrat : substrat chimique
• Type de substrat : Substrat de phosphatase alcaline
• Enzyme cible : Phosphatase alcaline