Thermo Scientific™ Mutation Generation System Kit

Description

Les produits de transposon sont basés sur les machines de transposition du bactériophage Mu. Au cours de la phase lytique du cycle de vie du phage, la machine reproduit son génome par transposition répétée à l’intérieur du génome hôte. La réaction de transposition Mu a été modifiée en une réaction in vitro catalysée par une seule enzyme : MuA Transposase. Dans ce système, une réaction in vitro est capable de générer plus d’un million de clones par insertion de transposons.

Points clés

Le système de génération de mutations (kit MGS) et le système de génération d’arrêts (kit STOP) ont été développés pour l’analyse fonctionnelle des protéines. Ces nouveaux outils de transposon permettent la création de bibliothèques saturées de protéines mutées en une seule réaction moyennant un temps de manipulation plus faible que les autres méthodes. L’emplacement de l’insertion d’un transposon dans chaque clone muté peut être cartographié par PCR ou séquençage. Grâce aux kits MGS et STOP, des milliers de clones mutés sont prêts pour des études d’expression en 2 à 3 jours seulement.

Le kit MGS contient l’ensemble complet de réactifs pour la mutagénèse par balayage liant à base de transposons de n’importe quelle protéine cible. Les entranceposons du MGS sont conçus pour apporter des changements subtils dans la structure d’une protéine cible en insérant des liants in-frame de 15 bp dans tout le gène cible correspondant. Cette insertion cadrée permet la conservation des séquençages en aval.

Les Entranceposons du STOPKit contiennent des codons d’arrêt translationnels dans les trois cadres de lecture situés dans la portion à terminaison de la séquence de transposon. La modification propriétaire du Stop Generation System permet de générer une bibliothèque de suppression de terminal C saturée à partir de pratiquement n’importe quelle protéine cible moyennant une addition maximale de trois acides aminés.

Points clés

• Efficace : créez des bibliothèques d’insertion saturées pour le séquençage et l’analyse des protéines en une seule réaction
• Rapide : réduisez le temps de manipulation par rapport aux méthodes classiques
• Aléatoire : éliminez la préférence du site cible ou l’insertion d’un point chaud