Invitrogen™ ELISA Ready-Set-Go!™ Ig Isotypage pour souris eBioscience™ Kit

Description

Le kit ELISA d’immunoglobuline (Ig) de souris non enrobée contient des paires d’anticorps pré-appariés et des réactifs permettant de réaliser des tests immuno-enzymatiques (ELISA) pour détecter et identifier les Ig de souris. Le tampon de lavage et la solution d’arrêt sont nécessaires pour finaliser la réaction ELISA et sont vendus séparément.Principe de la méthode Les ELISA sont conçus pour mesurer la quantité de la cible liée entre une paire d’anticorps appariée.Un anticorps spécifique à la cible est revêtu au fond des puits d’une microplaque ; il s’agit d’un procédé de nuit.Les échantillons, étalons ou témoins sont ensuite ajoutés à ces puits et se lient à l’anticorps immobilisé (capture).Un sandwich est formé par l’ajout du second anticorps (détecteur), une solution de substrat qui réagit avec le complexe enzyme-anticorps-cible pour produire un signal mesurable.L’intensité de ce produit coloré est directement proportionnelle à la concentration de TP (p) présente dans l’échantillon d’origine.

L’isotype d’un anticorps primaire et l’application dans laquelle il est utilisé peuvent entraîner une coloration de fond. Le bruit de fond des anticorps primaires peut être causé par la liaison aux récepteurs Fc sur les cellules cibles ; par des interactions non spécifiques avec les protéines cellulaires, les glucides et les lipides ; ou par autofluorescence cellulaire. Les anticorps de contrôle d’isotype peuvent agir comme des contrôles négatifs pour aider à différencier le signal de fond non spécifique du signal d’anticorps spécifique, car ils n’ont aucune spécificité pertinente pour un antigène cible. Bien que les contrôles d’isotypes soient les plus couramment utilisés dans la cytométrie en flux, ils sont utiles dans d’autres applications telles que l’immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), l’immunohistochimie et les déplacements de gel. Les contrôles d’isotypes doivent correspondre aux espèces d’anticorps primaires et à l’isotype afin que le niveau de coloration spécifique par l’anticorps primaire puisse être déterminé avec précision. En cas d’utilisation d’anticorps primaires marqués directement, le contrôle d’isotype fonctionne mieux s’il est conjugué avec le même marquage que l’anticorps de test.