Thermo Scientific™ Kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus

Description

Le kit de synthèse d’ADNc de premier brin Maxima H Minus† est un système complet permettant la synthèse très efficace de l’ADNc premier brin. Ce kit utilise la transcriptase inverse (RT) Maxima H Minus, qui est une enzyme avancée obtenue par évolution in vitro de la M-MuLV RT. L’enzyme présente la thermostabilité la plus importante parmi les dérivés de la M-MuLV RT et est dénuée de l’activité RNase H. Le kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus permet la synthèse d’ADNc d’une longueur allant jusqu’à 20 kb à des températures élevées (jusqu’à 65°C), supplantant les capacités d’autres systèmes à produire de l’ADNc pleine longueur. En raison des taux de synthèse accrus, la réaction peut être effectuée en 30 minutes.

Le nouveau kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus avec DNasedb offre un flux de travail considérablement simplifié qui combine l’élimination de l’ADN génomique et la synthèse d’ADNc en une procédure à un tube. Le kit contient une nouvelle DNase spécifique double brin (DNasedb) conçue pour éliminer l’ADN génomique contaminant des préparations d’ARN en 2 minutes sans nuire à la qualité ou à la quantité d’ARN. L’activité de la DNasedb hautement spécifique vers l’ADN double brin garantit que l’ADN simple brin (tel que l’ADNc et les amorces) n’est pas clivé et que l’ARN traité par la DNasedb peut être directement ajouté à la transcription inverse.

Ce kit utilise la transcriptase inverse (RT) Maxima H Minus, qui est une enzyme avancée obtenue par évolution in vitro de la M-MuLV RT. L’enzyme présente la thermostabilité la plus importante parmi les dérivés de la M-MuLV RT et est dénuée de l’activité RNase H. Le kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus permet la synthèse d’ADNc d’une longueur allant jusqu’à 20 kb à des températures élevées (jusqu’à 65°C), supplantant les capacités d’autres systèmes à produire de l’ADNc pleine longueur. En raison des taux de synthèse accrus, la réaction peut être effectuée en 30 minutes.
Le nouveau kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus avec DNasedb offre un flux de travail considérablement simplifié qui combine l’élimination de l’ADN génomique et la synthèse d’ADNc en une procédure à un tube. Le kit contient une nouvelle DNase spécifique double brin (DNasedb) conçue pour éliminer l’ADN génomique contaminant des préparations d’ARN en 2 minutes sans nuire à la qualité ou à la quantité d’ARN. L’activité hautement spécifique de la DNasedb vers l’ADN double brin garantit que l’ADN simple brin (comme l’ADNc et les amorces) n’est pas clivé et que l’ARN traité par DNasedb peut être directement ajouté à la transcription inverse.

Points clés

• Étape d’élimination de l’ADN génomique intégrée
• Augmentation des températures de réaction : le premier brin d’ADNc peut être synthétisé dans la plage de températures allant de 42 à 65°C.
  •Rendements élevés d’ADNc premier brin pleine longueur : avec modèles d’ARN jusqu’à 20 kb
• Amorçage flexible : oligo(dT)₁₈, hexamère aléatoire ou amorces spécifiques aux gènes

• Synthèse d’ADNc premier brin pour RT-PCR
• Construction de bibliothèques d’ADNc
• Génération de sondes pour hybridation
• Synthèse d’ARN antisens

• Le kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus contient le mélange enzymatique Maxima H Minus, les amorces Oligo(dT)₁₈ et hexamères aléatoires, le tampon RT 5X, le mélange dNTP et de l’eau exempte de nucléase.
• En plus des composants répertoriés ci-dessus, le kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus avec DNasedb contient la DNasedb et le tampon de la DNasedb 10X.

• Le mélange enzymatique Maxima H Minus contient la transcriptase inverse Maxima H Minus et l’inhibiteur d’ARNase RiboLock. L’inhibiteur d’ARNase RiboLock protège efficacement les modèles d’ARN de la dégradation par les RNases A, B et C à des températures jusqu’à 55°C.
• Lesamorces oligo(dT)₁₈ et les amorces hexamères aléatoires sont fournies avec le kit. Les amorces hexamères aléatoires se lient de façon non spécifique et sont utilisées pour synthétiser l’ADNc à partir de tous les ARN d’une population d’ARN totaux. L’amorce oligo(dT)₁₈ se fixe de manière sélective par hybridation à l’extrémité 3 de l’ARN poly(A), synthétisant l’ADNc uniquement à partir des ARNm à queue poly(A). Les amorces spécifiques aux gènes peuvent également être utilisées avec le kit pour amorcer la synthèse à partir d’une séquence donnée.
• Le mélange dNTP 10 mM est une solution aqueuse pré-mélangée de dATP, dTTP, dCTP et dGTP
• De l’eau exempte de nucléase est fournie pour la préparation de la réaction et la dilution des échantillons d’ADN. L’absence d’endo-, d’exodéoxyribonucléases, de ribonucléases et de phosphatases a été confirmée par des tests de qualité adéquats. †Attention, le nom de ce produit a changé. L’ancien nom était Synthèse d’ADNc premier brin RevertAid Premium

Danger : Non
Contrôle qualité : Testé fonctionnellement en RT-PCR en utilisant 100 fg d’ARN GAPDH de contrôle et les amorces de contrôle GAPDH générant un produit de 496 bp sur un gel d’agarose à 1 % après coloration au bromure d’éthidium.
Condition de conservation : -20°C