IBA Lifesciences Kit d’adaptateurs M6

Description

Le système de purification Strep-tag™ est basé sur l’interaction hautement sélective et facilement contrôlable entre le peptide Strep-tag™II et le site de liaison à la biotine d’une streptavidine spécifique appelée Strep-Tactin™.
Strep-tag™II se lie presque 100 fois plus fortement à Strep-Tactin™ qu’à la streptavidine, mais élue dans des conditions physiologiques douces. Une purification d’affinité rapide en une étape entraîne des protéines de fusion actives de pureté maximale. Des tampons physiologiques, comme le PBS en association avec une large gamme de détergents, chélateurs, sels et conditions redox peuvent être utilisés. L’élution compétitive avec la desthiobiotine, un analogue de la biotine à la fois peu coûteux, à liaison réversible et stable, permet d’atteindre des facteurs de purification inégalés. Le système est sûr et facile à utiliser ; la régénération des colonnes et l’état de l’activité sont visualisés par un changement de couleur de la colonne de purification. Un avantage particulier de Strep-tag™II est sa composition neutre en acides aminés qui n’entrave ni le repliement des protéines ni la sécrétion des protéines, et qui n'interfère pas non plus avec la fonction protéique. Strep-tag™ permet la purification de protéines recombinantes à plus de 99 % de pureté en une seule étape à partir de lysats bruts. Les facteurs de purification extraordinaires sont basés sur i) une très faible tendance de Strep-Tactin™ à se lier à d’autres protéines de manière non spécifique, ii) une interaction Strep-tag™II:Strep-Tactin™ hautement spécifique et iii) une élution compétitive spécifique avec des quantités minimes de desthiobiotine. De plus, la grande stabilité de Strep-Tactin™ est la base des résines d’affinité robustes.
Cycle de purification des protéines Strep-tag™
Procédure de purification dans des conditions physiologiques. La purification des protéines de fusion Strep-tag™II peut être effectuée dans des conditions quasi physiologiques, p. ex., dans un tampon PBS et pour l’élution dans un tampon de PBS et de desthiobiotine à 2,5 mM.
Étapes 1 et 2 :
Le lysat cellulaire est ajouté à la colonne. Une fois que la protéine marquée s’est liée spécifiquement à Strep-Tactin™, les protéines hôtes sont lavées rapidement avec de petites quantités de tampon de lavage physiologique.
Étape 3 :
Ensuite, la protéine Strep-tag™II liée est éluée en ajoutant un tampon de lavage contenant de la desthiobiotine à 2,5 mM qui concurrence spécifiquement le site de liaison à la biotine. Puisque les conditions du tampon pendant l’élution restent essentiellement inchangées, les protéines à liaisons potentiellement non spécifiques (sans Strep-tag™) ne seront pas éluées et ne contamineront donc pas la protéine d’intérêt. Avec la liaison spécifique de Strep-tag™ à Strep-Tactin™, il s’agit de la deuxième étape de la procédure de purification, conduisant à une très grande pureté protéique
Étapes 4 et 5 :
Pour régénérer la colonne, du colorant jaune azo HABA (acide 2-[4-hydroxy-benzeneazo] benzoïque) est ajouté en excès pour déloger la desthiobiotine du site de liaison. Une fois que HABA se lie au site de liaison, la couleur devient rouge, indiquant de façon pratique l’état de régénération et d’activité de la colonne.
Étape 6 :
HABA peut être enlevé simplement en ajoutant un tampon de lavage. Une fois la couleur rouge disparue, la colonne peut être réutilisée. La résine Strep-Tactin™ peut être régénérée et réutilisée 3 à 5 fois sans perte de performance.
Résines Strep-Tactin™
Pour la purification d’affinité Strep-tag™. Plusieurs versions de résine Strep-Tactin™ sont disponibles et diffèrent par leurs propriétés et applications. Bien que Strep-Tactin™ Sepharose™ soit utilisé de préférence pour la chromatographie en phase en écoulement par gravité, Strep-Tactin™ Superflow™, le nouveau Strep-Tactin™ Superflow ™ haute capacité et Strep-Tactin™ MacroPrep™ peuvent également être utilisés pour les applications basse pression, FPLC et HPLC, etStrep-Tactin™ POROS™ (20 et 50) pour la chromatographie FPLC et HPLC. De plus, Superflow est particulièrement adapté aux débits accrus et à la purification de complexes protéiques de grande taille.
Cartouches H-PR (« hautement résistantes à la pression ») (No. 5)
Les cartouches H-PR sont principalement conçues pour être utilisées avec les stations de travail chromatographiques utilisant 10 à 32 raccords (par exemple, HPLC et AKTA™). Elles peuvent cependant être utilisées avec d’autres stations de travail, des seringues ou des pompes péristaltiques à l’aide d’adaptateurs courants. Les boîtiers de colonne étant hautement résistants à la pression (jusqu’à 20 bar), les cartouches H-PR peuvent être utilisées avec un réducteur de débit. Les cartouches peuvent être connectées en série pour augmenter la capacité.
Le tag court n’influence pas la protéine

• Purification rapide en une étape dans des conditions physiologiques
• Pureté et bioactivité inégalées