Thermo Scientific™ PstI (10 U/μl)

Description

ADN lambda digéré avec PstI, 0,7 % d’agarose, 28 sites de clivage

Les endonucléases de restriction classique sont une grande collection d’enzymes de restriction de haute qualité, optimisées pour fonctionner dans l’un des tampons du système à cinq tampons. En outre, le tampon Tango universel est fourni pour des raisons de commodité dans les digestions doubles. Toutes les enzymes présentent une activité de 100 % dans le tampon et les conditions de réaction recommandés. Pour garantir une performance constante, les tampons de réaction d’enzymes de restriction Thermo Scientific contiennent de la BSA prémélangée, qui améliore la stabilité de nombreuses enzymes et lie les contaminants qui peuvent être présents dans les préparations d’ADN.

5'..C T G C A▵G...3'

3'..G▵A C G T C...5'

Conditions pour une activité à 100 %

• Tampon O 1X : Tris-HCl 50 mM (pH 7,5 à 37°C), MgCl₂ 10 mM, NaCl 100 mM et BSA 0,1 mg/ml
• Laissez incuber à 37°C

Tampon de stockage

• PstI est fournie sous la forme suivante : Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 à 25°C), NaCl 200 mM, DTT 1 mM, EDTA 0,1 mM, Triton X-100 0,15 %, BSA 0,2 mg/ml et glycérol 50 % (v/v)

Ligature et clivage

• Après une digestion en excès de 50 fois avec Pstl, plus de 95 % des fragments d’ADN peuvent être ligaturés et recoupés

Effets de méthylation

• Dam : ne se chevauche jamais —aucun effet
• v
• CpG : ne se chevauche jamais —aucun effet
• EcoKI : ne se chevauche jamais —aucun effet
• EcoBI : ne se chevauche jamais —aucun effet

Digestion de l’ADN incorporé à l’agarose

• Au moins 5 unités de l’enzyme sont nécessaires pour la digestion complète d’1 μg d’ADN Lambda intégré à de l’agarose en 16 heures

Extrémités compatibles

• Alw21I, ApaI, BseSI, Eco24I, Mph1103I, PstI, SacI, SdaI

Remarque :

Des conditions de pH élevé, de concentration en sel faible, de glycérol élevé, de DMSO à 8 % peuvent induire une activité Star (Malyguine, E., et al., Gene, 8, 163-177, 1980). Séquences environnantes : la présence de cycles adjacents de paires de bases G-C confère une résistance significative au clivage (Armstrong, K. et Bauer, W.R., NAR, 10, 993-1007, 1982). L’incorporation de 100 % de dUTP sur le site de reconnaissance réduit le clivage de PstI à 25 % (Glenn, T.C., et al., Biotechniques, 17, 1086-1090, 1994). PstI ne coupe pas AGCTGCAG lorsqu’elle est méthylée par la méthyltransférase AluI .