Thermo Scientific™ PagI (BspHI) (10 U/μL)

Description

ADN Lambda digéré avec PagI (BspHI), 0,7 % d’agarose, 3 sites de clivage

Les endonucléases de restriction classique sont une grande collection d’enzymes de restriction de haute qualité, optimisées pour fonctionner dans l’un des tampons du système à cinq tampons. En outre, le tampon Tango universel est fourni pour des raisons de commodité dans les digestions doubles. Toutes les enzymes présentent une activité de 100 % dans le tampon et les conditions de réaction recommandés. Pour garantir une performance constante, les tampons de réaction d’enzymes de restriction Thermo Scientific contiennent de la BSA prémélangée, qui améliore la stabilité de nombreuses enzymes et lie les contaminants qui peuvent être présents dans les préparations d’ADN.

5'...T▵C A T G A...3'

3'...A G T A C▵T...5'

Conditions pour une activité à 100 % :

• Tampon O 1X : Tris-HCl 50 mM (pH 7,5 à 37°C), MgCl₂ 10 mM, NaCl 100 mM et BSA 0,1 mg/ml
• Laissez incuber à 37°C

Tampon de stockage :

• Pagl est fournie sous la forme suivante : Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 à 25°C), NaCl 100 mM, DTT 1 mM, EDTA 1 mM, BSA 0,2 mg/ml et glycérol 50 % (v/v)

Ligature et reclivage :

• Après une digestion en excès de 50 fois avec Pagl, plus de 95 % des fragments d’ADN peuvent être ligaturés et recoupés

Effets de méthylation :

• Dam : possibilité de chevauchement ; clivage affecté
• v
• CpG : ne se chevauche jamais —aucun effet
• EcoKI : ne se chevauche jamais —aucun effet
• EcoBI : possibilité de chevauchement ; clivage affecté

Digestion de l’ADN incorporé à l’agarose :

• Au moins 5 unités de l’enzyme sont nécessaires pour une digestion complète d’1 μg d’ADN Lambda intégré à de l’agarose en 16 heures

Extrémités compatibles :

• AflIII, PscI, DsaI, Eco130I, NcoI

Remarque :

Une faible concentration en sels, une forte concentration en glycérol (> 5 %), un pH > 8,0 ou un large excès d’enzyme peut induire une activité Star. Le clivage Pagl est affecté par le chevauchement avec la méthylation dam. Pour éviter la méthylation dam, utilisez une souche dam-, dcm telle que GM2163 (#M0099).