Thermo Scientific™ BplI (5 U/μL)

Description

Les endonucléases de restriction classique sont une grande collection d’enzymes de restriction de haute qualité, optimisées pour fonctionner dans l’un des tampons du système à cinq tampons. En outre, le tampon Tango universel est fourni pour des raisons de commodité dans les digestions doubles. Toutes les enzymes présentent une activité de 100 % dans le tampon et les conditions de réaction recommandés. Pour garantir une performance constante, les tampons de réaction d’enzymes de restriction Thermo Scientific contiennent de la BSA prémélangée, qui améliore la stabilité de nombreuses enzymes et lie les contaminants qui peuvent être présents dans les préparations d’ADN.

5'...▵ ₈(N) G A G (N)₅ C T C (N)₁₃▵...3'

3'...▵₁₃(N) C T C (N)₅ G A G (N)₈ ▵...5'

Conditions pour une activité à 100 % :

• [Tampon Tango™ 1X] + SAM : [Tris-acétate 33 mM (pH 7,9 à 37°C), Mg-acétate 10 mM, K-acétate 66 mM et BSA 0,1 mg/ml] + S-adénosylméthionine 0,05 mM
• Laissez incuber à 37°C

Tampon de stockage :

• BplI est fournie sous la forme suivante : Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 à 25°C), KCl 100 mM, DTT 1 mM, EDTA 1 mM, BSA 0,2 mg/ml et glycérol 50 % (v/v)

Ligature et reclivage :

• Après une digestion en excès de 10 fois avec Bpll, plus de 70 % des fragments d’ADN peuvent être ligaturés, mais aucun de ces derniers ne peut être recoupé en raison de la méthylation de la séquence de reconnaissance par cette enzyme

Effets de méthylation :

• Dam : ne se chevauche jamais ; aucun effet
• Dcm : ne se chevauche jamais — aucun effet
• CpG : possibilité de chevauchement ; aucun effet
• EcoKI : ne se chevauche jamais ; aucun effet
• EcoBI : ne se chevauche jamais — aucun effet

Digestion de l’ADN incorporé à l’agarose :

• Au moins 10 unités de l’enzyme sont nécessaires pour la digestion complète d’1 μg d’ADN lambda intégré à de l’agarose en 16 heures

Remarque :

L’activité de BplI ne nécessite que Mg²+, mais est stimulée par la S-adénosylméthionine. La S-adénosylméthionine 0,05 mM se traduit par une hausse 100 fois plus importante dans l’activité Bpll. Cependant, un clivage complet de certains substrats avec BplI est difficile à obtenir. La concentration de BplI est déterminée par le taux maximal de clivage obtenu, lorsque le schéma de fragmentation observé ne présente aucun changement quand on augmente encore davantage la quantité d’enzyme.