Thermo Scientific™ Phosphatase alcaline thermosensible FastAP (1 U/μl)

Description

La phosphatase alcaline thermosensible FastAP catalyse la libération de groupes de 5′- et 3′-phosphate à partir de l’ADN, de l’ARN et des nucléotides. Cette enzyme élimine également les groupes de phosphates des protéines.

FastAP est une phosphatase alcaline innovante qui est active dans tous les tampons d’enzyme de restriction Thermo Scientific ainsi que dans les tampons de PCR. Elle déphosphoryle tous les types d’extrémités d’ADN (franches, en saillies de 5’ et 3’) en 10 minutes à 37°C. L’enzyme est inactivée en 5 minutes à 75°C. Par conséquent, l’élimination de la phosphatase alcaline n’est pas requise avant la ligature.

Points clés

• Enzyme recombinante
• Déphosphorylation rapide : 10 minutes à 37°C
• Inactivation rapide et complète : 5 minutes à 75°C
• Digestion et déphosphorylation simultanées de l’ADN vecteur
• 100 % active dans l’enzyme de restriction et les tampons de PCR
• Un seul protocole pour tous les types d’extrémités d’ADN :
  • Saillies de 5’
  • Saillies de 3’
  • extrémités franches
  • nucléotides simples
• Purification PCR en conjonction avec Exo I
• Déphosphorylation des protéines

Applications

• Déphosphorylation de l’ADN vecteur de clonage afin d’éviter la recircularisation pendant la ligature
• Digestion et déphosphorylation simultanées de l’ADN vecteur
• Purification des produits de PCR : détérioration des nucléotides avant le séquençage des produits de PCR
• Déphosphorylation des terminaisons 5’ des acides nucléiques avant le marquage à l’aide de la kinase polynucléotide T4
• Autres applications dans lesquelles la déphosphorylation des substrats d’ADN et d’ARN est nécessaire
• Déphosphorylation des protéines

Remarque

• La liaison de la phosphatase alcaline thermosensible FastAP à l’ADN peut entraîner un décalage des bandes dans les gels d’agarose. Pour éviter cela, incubez les échantillons avec une solution de colorants de charge d’ADN et SDS à 65°C pendant 10 minutes et refroidissez-les sur de la glace avant l’électrophorèse.
• La phosphatase alcaline thermosensible FastAP est active sur tous les tampons d’enzymes de restriction et peut être ajoutée directement à l’ADN digéré. L’inactivation par la chaleur de l’enzyme de restriction avant la réaction de déphosphorylation n’est pas nécessaire.