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Molecular Probes™ Click-iT™ EdU Pacific Blue™ Flow Cytometry Assay Kit
Kit de dosage de cytométrie en flux Click-iT™ EdU Pacific Blue™
Marque: Molecular Probes™ C10418
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Description
Le kit de dosage de cytométrie en flux Click-iT™ EdU Pacific Blue™ fournit un dosage plus simple et plus robuste pour analyser la réplication de l’ADN dans les cellules en prolifération par rapport aux méthodes BrdU traditionnelles. L’ADN nouvellement synthétisé est analysé avec le laser du cytomètre en flux à 405 nm.Consultez notre guide de sélection de tous les dosages Click-iT™ EdU et Click-iT™ Plus EdU pour la cytométrie en flux.
Une méthode avancée vous donnant des résultats supérieurs à BrdU
La méthode la plus précise pour analyser la prolifération consiste à mesurer directement la synthèse d’ADN. À l’origine, ceci était effectué en incorporant des nucléosides radioactifs, c’est-à-dire la 3H-thymidine. Cette méthode a été remplacée par la détection à base d’anticorps de l’analogue de nucléoside, bromodésoxyuridine (BrdU). L’essai de cytométrie de flux Click-iT™ Plus EdU est une alternative innovante à l’essai BrdU. EdU (5-éthynyl-2´-désoxyuridine) est un analogue de la thymidine, incorporé à l’ADN lors de la synthèse active de l’ADN. La détection se base sur la chimie clic, une réaction covalente entre un azide et un alcyne, catalysée par le cuivre. Dans cette application, l’alcyne se trouve dans la fraction éthynyle de l’EdU, alors que l’azide est couplé au colorant Alexa Fluor™ 488, Alexa Fluor™ 647 ou Pacific Blue™. Les méthodes traditionnelles de cytométrie en flux sont utilisées pour déterminer le pourcentage de cellules en phase S dans la population (Fig. 1).
Conditions douces lui permettant d’être utilisé avec des anticorps et des colorants de cycle cellulaire
Les avantages du marquage à l’EdU Click-iT™ deviennent rapidement évidents lors de la réalisation de l’essai (Fig. 2) La petite taille du colorant azide permet de détecter efficacement l’EdU incorporé dans des conditions douces, tandis que la fixation standard à base d’aldéhyde et la perméabilisation du détergent suffisent pour que le réactif de détection Click-iT™ puisse accéder à l’ADN. Par comparaison, les essais BrdU exigent de dénaturer l’ADN (à l’aide de HCl, de chaleur ou de digestion avec la DNase) pour exposer le BrdU afin qu’il puisse être détecté avec un anticorps anti-BrdU. Le traitement des échantillons en vue d’un essai BrdU peut entraîner l’altération de signal de la distribution du cycle cellulaire, ainsi que la destruction des sites de reconnaissance d’antigènes lorsque la méthode HCl est utilisée. Le kit de prolifération cellulaire EdU facile d’utilisation, lui, est compatible avec les colorants du cycle cellulaire. Ce kit d’essai biologique EdU peut également être multiplexé avec des anticorps contre des marqueurs intracellulaires et de surface.
Protocole rapide et simple
Le protocole Click-iT™ EdU se base sur la fixation de l’aldéhyde et les étapes de perméabilisation du détergent pour le marquage immunohistochimique des anticorps, mais l’EdU est compatible avec d’autres agents de fixation/perméabilisation, dont la saponine et le méthanol. Vous serez prêt à analyser vos données de prolifération cellulaire après seulement cinq étapes :
Des résultats précis et économiques
Grâce à l’augmentation du nombre d’essais par kit, le kit d’essai pour cytométrie en flux Click-iT™ EdU Pacific Blue™ se veut plus économique que les essais BrdU traditionnels et, donc, idéal pour les expériences de grande envergure.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécification
| Contient de l’EDU (5-éthynyl-2’ -désoxyuridine),™ de l’azoture bleu du Pacifique, du diméthylsulfoxyde anhydre (DMSO),™ du fixateur Click-iT,™ du tampon de perméabilisation et de lavage Click-iT à base de saponine, du sulfate de cuivre (II) et™ de l’additif tampon Click-iT EDU. |
|
| Cytomètre en flux | |
| Pacific Blue™ | |
| Tube(s) | |
| Click-iT™, Pacific Blue™ | |
| Température ambiante |
| Fluorescence | |
| Kit de dosage pour cytométrie en flux | |
| 404 / 450 | |
| Moins dangereux | |
| 50 dosages |
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.