Molecular Probes™ BODIPY™ FL-C₅ NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Description

Le colorant BODIPY™ FL-C₅ est un colorant fluorescent vert lumineux dont l’excitation et l’émission sont similaires à celles de la fluorescéine (FITC) ou du colorant Alexa Fluor™ 488. Il présente un coefficient d’extinction élevé et un rendement quantique de fluorescence et est relativement insensible à la polarité du solvant et au changement de pH. Contrairement aux fluorophores hautement solubles dans l’eau, le colorant Alexa Fluor™ 488 et la fluorescéine (FITC), les colorants BODIPY™ ont des propriétés hydrophobes uniques, idéales pour la coloration des lipides, des membranes et d’autres composés lipophiles. Le colorant BODIPY™ FL-C₅ a une durée de vie à l’état excité relativement longue (généralement 5 nanosecondes ou plus), ce qui est utile pour les dosages à base de polarisation de fluorescence et une grande section transversale à deux photons pour l’excitation multiphotonique. En plus de formulations de colorant réactif, nous proposons le colorant BODIPY™ FL-C₅ conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules (en savoir plus).

L’ester NHS (ou ester succinimidylique) de BODIPY™ FL-C₅ est l’outil le plus apprécié pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH₂) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Les conjugués BODIPY™ FL-C₅ qui en résultent présentent une fluorescence brillante, des bandes passantes à émission étroite et des durées de vie à l’état excité relativement longues, qui peuvent être utiles pour les dosages de polarisation de fluorescence et la microscopie à excitation à deux photons (TPE).

Ce colorant réactif contient un espaceur d’alkyle C₅ entre le fluorophore et le groupe ester NHS. Cet espaceur permet de séparer le fluorophore de son point d’attache, ce qui peut réduire l’interaction du fluorophore avec la biomolécule à laquelle il est conjugué.

Informations détaillées concernant cet ester NHS BODIPY™ FL-C₅ :

Marqueur fluorophore : Colorant BODIPY™ FL-C₅
Groupe de réactifs : Ester NHS (ester de succinimidyle)
Réactivité : Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
Ex / Em du conjugué : 504 / 511 nm
Coefficient d’extinction : 87 000 cm-1M-2
Poids moléculaire : 417,22

Réaction de conjugaison typique
Les réactifs amino-réactifs peuvent être conjugués avec pratiquement n’importe quel(le) protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). La taille de la réaction peut être adaptée à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.

L’ester NHS BODIPY™ est typiquement dissous dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité, et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1 à 0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.

Purification de conjugué
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant BODIPY™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (A33086)
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 20 à 50 μg (A33087)
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 50 à 100 μg (A33088)

En savoir plus sur le marquage des protéines et des anticorps
Nous proposons une large sélection de kits de marquage d’anticorps et de protéines Molecular Probes™ pour convenir à votre produit de départ et à votre configuration expérimentale. Consultez nos kits de marquage d’anticorps ou utilisez notre outil de sélection de chimie de marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits de marquage, lisez Kits pour le marquage de protéines et d’acides nucléiques, section 1.2 dans le manuel Molecular Probes™.

Nous vous préparerons un conjugué personnalisé
Si vous ne trouvez pas ce que vous cherchez dans notre catalogue en ligne, nous vous préparerons un conjugué d’anticorps ou de protéines personnalisé. Notre service de conjugaison personnalisé est efficace et confidentiel, et nous croyons en la qualité de notre travail. Nous sommes certifiés ISO 9001:2000.