Invitrogen™ Stabilized Blood-to-C_T™ Nucleic Acid Preparation Kit for qPCR, compatible with PAXgene™ Blood RNA Tubes

Description

Pour une utilisation avec la qRT-PCR en 1 étape et en 2 étapes

Le kit de préparation d’acides nucléiques stabilisés pour qPCR Blood-to-C_T permet d’effectuer une analyse d’expression directement à partir d’une aliquote de 500 μl de sang total humain collectée dans des tubes d’ARN de prélèvement sanguin PAXgene sans purification de l’ARN classique. Cette procédure simple crée un lysat qui peut aller directement dans la transcription inverse et la PCR en temps réel avec une sensibilité et une spécificité équivalentes à l’ARN conventionnellement purifié. Ce kit permet de gagner du temps, génère beaucoup moins de déchets et offre un flux de travaux simple adapté à quelques échantillons ou pouvant facilement être incorporé dans des applications automatisées à haut débit.

• Détection de l’ARN total (y compris le miARN) provenant des tubes d’ARN sanguin Tempus™, sans besoin de purification
• Robuste — Échantillon de 500 μl traité à température ambiante avec des résultats équivalents à ceux de l’ARN purifié
• Format flexible — Les échantillons peuvent être préparés dans des microtubes à centrifuger ou dans des plaques à 96 puits manuels / automatisés

Flux de travaux simple sans sacrifier la sensibilité ni la spécificité
Le processus consiste au culotage et au lavage d’une aliquote de 500 ul extraite d’un tube de prélèvement sang, suivi d’une étape de digestion  DNase unique qui préserve l’intégrité de l’ARN. La préparation s’effectue entièrement à température ambiante, contrairement à d’autres produits nécessitant des étapes d’incubation spécifiques à la température. Il est possible de préparer jusqu’à 96 échantillons avec la moitié du temps nécessaire à la purification compétitive des colonnes de centrifugation pour traiter uniquement 12 échantillons, avec moins d’efforts pratiques. Le lysat obtenu peut être stocké pour une utilisation ultérieure (1 heure à 4°C ou congelé pendant 5 mois). Cette procédure simple s’effectue dans le même puits de traitement des échantillons, du début à la fin, ce qui signifie qu’il n’y a pas de transferts d’échantillons. Les données en temps réel de RT-PCR générées à partir du lysat sont équivalentes aux résultats obtenus avec de l’ARN purifié de façon conventionnelle à partir des mêmes tubes et ont été validées à l’aide des réactifs qPCR suivants :
• Kit haute capacité Applied Biosystems™ High Capacity RNA-to-cDNA™ et Master Mix d’expression génétique TaqMan™
• Kit de synthèse d’ADNc SuperScript™ VILO™ d'Invitrogen et Master Mix d’expression génétique TaqMan
• Kit de transcription inverse Applied Biosystems™ TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit et TaqMan™ Universal Master Mix II
• Kit de réactifs Applied Biosystems™ TaqMan One-Step RT-PCR Master Mix Reagents Kit
Les réactifs de transcription inverse pour la synthèse de l’ADNc, Master Mix TaqMan et dosages TaqMan pour l’analyse PCR en temps réel sont vendus séparément et ne sont pas inclus dans le kit.

Le nombre total de réactions de transcription inverse et de PCR possibles à partir d’un échantillon de départ dépend des exigences minimales des kits de RT-PCR souhaités (reportez-vous à la documentation de l’utilisateur pour plus de détails).

Sélection, découverte ou validation
Pour les utilisateurs avec des gènes d’intérêt spécifiques, le kit de préparation d’acides nucléiques stabilisés Blood-to-C_T pour qPCR a été conçu pour permettre un criblage rapide à partir d’une petite quantité d’échantillon de départ (environ 5 % du volume total d’un tube d’ARN de prélèvement sanguin Tempus correctement rempli par échantillon). Le reste du tube de prélèvement de sang peut être archivé pour une utilisation ultérieure ou purifié au besoin.

Ceux qui réalisent des expériences de découverte ou de validation avec une analyse RT-PCR en temps réel économiseront des ressources, du temps et de l’argent grâce au kit de préparation des acides nucléiques Blood-to-C_T pour qPCR, tout en utilisant un processus évolutif permettant aux laboratoires bloqués par la procédure de purification conventionnelle de commencer finalement à traiter les échantillons avec facilité.

Analyse du miARN
Avec l’accent croissant mis sur l’ARN non codant et son rôle réglementaire dans le développement et les maladies, il est rassurant de savoir que ces petites molécules d’ARN, néanmoins importantes, peuvent être détectées correctement avec le kit de préparation des acides nucléiques stabilisé Blood-to-C_T pour qPCR. Nos scientifiques ont testé le lysat avec le kit de transcription inverse de MicroARN TaqMan Applied Biosystems et le mélange Master Mix II TaqMan Universal en les comparant à un grand panel de dosages de microARN TaqMan et ont généré des résultats égaux ou supérieurs à ceux obtenus avec le produit de purification de miARN du principal concurrent.

Encombrement réduit et moins de déchets = plus d’économies
Le kit de préparation des acides nucléiques Stabilized Blood-to-C_T pour la qPCR simplifie le flux de travaux et réduit le poids des déchets plastiques totaux de 75 % pour un nombre comparable d’échantillons traités par colonnes et ne génère aucun déchet organique. L’empreinte peu encombrante optimise la capacité du congélateur.
Pour les utilisateurs nécessitant une purification complète : Si la purification d’ARN conventionnelle est toujours nécessaire pour le tube de prélèvement sanguin restant, utilisez le kit d’isolement d’ARN pour tubes de prélèvement sanguin stabilisés MagMAX. Ce kit optimise le rendement de l’ARN total des tubes d’ARN sanguins Tempus via la technologie de séparation à base de microbilles magnétiques.
Spécifications :
• Compatibilité : Tubes d’ARN sanguin Tempus
• Temps de traitement : Moins d’1 heure
•Format : Tubes à centrifuger, plaques à 96 puits
• Nombre de préparations : 200 réactions

• Moins de ressources utilisées, moins dangereuses, moins de déchets

PAXgene™ et PreAnalytiX™ sont des marques déposées de PreAnalytiX GmbH. Aucune commandite, approbation ou affiliation n’est impliquée dans les présentes.

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