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Invitrogen™ RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE
Isolement total d’acide nucléique des tissus FFPE
Marque: Invitrogen™ AM1975
Includes: 16 ml de tampon de digestion ; 60 ml de concentrat de lavage 1 ; 60 ml de concentrat de lavage 2 / 3 ; 80 tubes de prélèvement ; 40 cartouches de filtre ; 19,2 ml d’additif d’isolement ; 5 ml de solution d’élution ; 160 μl de protéase ; 240 μl de tampon de DNase 10X ; 160 μl de DNase ; 400 μl de RNase A.
Description
Le kit d’isolement de l’acide nucléique total RecoverAll™ pour FFPE est destiné à l’extraction de l’acide nucléique total à partir de tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE). Des réactifs sont inclus en quantité suffisante pour 40 purifications à partir de quatre sections de 20 µm maximum ou jusqu’à 35 mg de carottes de forage non sectionnées chacune. Caractéristiques du kit d’isolement de l’acide nucléique total RecoverAll™ pour FFPE :• Optimisé pour l’isolement des acides nucléiques totaux, y compris les microARN, à partir du tissu FFPE
• Aucune digestion de protéinase K requise pendant la nuit—procédez au déparaffinage dans la matinée et à la qRT-PCR dans l’après-midi
• Rendements typiques >50 % à celui des tissus non fixés
• Les acides nucléiques récupérés conviennent au séquençage de nouvelle génération, à la PCR en temps réel, à la PCR, au dépistage de mutations et aux analyses microarray
Extraction d’acides nucléiques à partir d’échantillons difficiles
Les échantillons tissulaires archivés contiennent des informations précieuses sur l’état de la maladie, mais il a traditionnellement été difficile d’en isoler les acides nucléiques à une qualité adaptée à l’analyse moléculaire. Les techniques de préservation standard utilisent la formaline pour maintenir la structure tissulaire et empêcher la putréfaction. Ceci dit, la formaline piège également les acides nucléiques et les modifie par des réticulations entre protéine et protéine, et entre protéine et acide nucléique. L’ARN (et en partie l’ADN) est souvent si fragmenté et chimiquement modifié qu’il est incompatible avec de nombreuses techniques d’analyse moléculaire. La fragmentation de l’ARN dans les tissus FFPE ne peut pas être inversée ; cependant, les conditions de digestion de protéase du kit RecoverAll™ sont conçues pour libérer une quantité maximale (voir la figure) de fragments d’ARN piégés de toutes tailles, y compris le microARN, dans un temps relativement court.
Solution pour le kit d’isolement d’acide nucléique total RecoverAll™
La procédure pour le kit d’isolement d’acide nucléique total RecoverAll™ nécessite environ 45 minutes de temps de manipulation et peut être terminée en moins d’un jour pour l’ARN. Les échantillons FFPE sont déparaffinés à l’aide d’une série de lavages au xylène et à l’éthanol. Ils sont ensuite soumis à une digestion approfondie de la protéase avec une durée d’incubation adaptée à la récupération de l’ARN ou de l’ADN. Les acides nucléiques sont ensuite purifiés à l’aide d’une méthode à filtre en verre rapide et sont élués dans de l’eau ou dans un tampon à faible teneur en sel.
Acides nucléiques pour presque toutes les applications en aval
Comme c’est le cas pour tous les tissus FFPE, la fixation et la conservation des échantillons provoquent généralement la fragmentation et la modification des acides nucléiques. C’est pourquoi des applications en aval, comme l’analyse de microréseaux, qui exigent plus d’ARN en parfait état que la qRT-PCR, peuvent exiger une modification pour des résultats optimaux. Bien que l’ADN ne fasse généralement pas l’objet d’une fragmentation aussi facile que l’ARN, il semble être plus réactif que la formaline et nécessite une durée de digestion par la protéase plus longue (2 jours) pour libérer des quantités substantielles d’ADN.
Non compatible avec le haut débit (manuel)
Purification et analyse d’ADN et d’ARN, extraction d’ARN, purification d’acide nucléique de spécialité (p. ex. acides nucléiques totaux), isolement total de l’ARN, ARN total à partir d’échantillons FFPE
Spécification
| • 16 ml de tampon de digestion (température ambiante) • 60 ml de concentrat de lavage 1 (température ambiante) • 60 ml de concentrat de lavage 2 / 3 (température ambiante) • 80 tubes de prélèvement (température ambiante) • 40 cartouches de filtre (température ambiante) • 19,2 ml d’additif d’isolement (température ambiante) • 5 ml de solution d’élution (-20°C, 4°C, ou température ambiante) • 160 µl de protéase (-20°C) • 240 µl de tampon de DNase 10X (-20°C) • 160 µl de DNase (-20°C) • 400 µl de RNase A (-20°C) Ce kit est livré en deux parties : une à température ambiante et une à -20°C. |
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| 45 min | |
| Échantillons fixés et FFPE, Paraffin-embedded (FFPE) Tissue | |
| Non compatible avec des cadences élevées (manuel) | |
| 40 Preps | |
| Jusqu’à 35 mg d’échantillons de carottes non découpées, jusqu’à quatre coupes de 20 µm |
| Colonne de centrifugation (filtre en fibre de verre) | |
| 60 μL | |
| ADN génomique, ARN total, micro-ARN | |
| Séquençage de nouvelle génération, PCR quantitative en temps réel (qPCR), PCR de transcriptase inverse (RT-PCR), analyse de microARN, transfert Southern, transfert Northern, PCR, construction de bibliothèques d’ADNc | |
| Box 1: Room Temperature Box 2: Dry Ice |
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| 24 µg |
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Nom du produit
Invitrogen™ RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE > 40 préparations
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
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