Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 568 C₅ Maleimide

Description

Alexa Fluor™ 568 est un colorant brillant, orange / rouge fluorescent, avec un niveau d’excitation parfaitement adapté à la ligne laser de 568 nm sur le laser à gaz mixte Ar-Kr. Utilisé pour une génération de signal stable en imagerie et en cytométrie en flux, le colorant Alexa Fluor™ 568 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. En plus de formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant Alexa Fluor™ 568 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules (en savoir plus).

Le dérivé de maléimide du colorant Alexa Fluor™ 568 est l’outil le plus utilisé pour conjuguer le colorant à un groupe thiol sur une protéine, un oligonucléotide thiophosphate ou un ligand de faible poids moléculaire. Le conjugué d’Alexa Fluor™ 568 résultant présente une fluorescence plus lumineuse et une photostabilité plus élevée que les conjugués d’autres fluorophores similaires sur le plan spectral.

Informations détaillées concernant l’AlexaFluor™ maléimide :

Marqueur fluorophore : colorant Alexa Fluor™ 568
Groupe réactif : maléimide
Réactivité : groupes thiol sur protéines et ligands, oligonucléotide thiophosphates
Ex / Em du conjugué : 575/600 nm
Coefficient d’extinction : 92 000 cm-1M-1
Colorants similaires sur le plan spectral : Rouge rhodamine
Poids moléculaire : 880,92

Réaction de conjugaison typique
La protéine doit être dissoute à une concentration de 50 à 100 μM dans un tampon approprié (10 à 100 mM phosphate, Tris ou HEPES), pH 7,0 à 7,5. Dans cette plage de pH, les groupes thiols de la protéine sont suffisamment nucléophiles pour réagir presque exclusivement avec le réactif en présence des groupes amines de la protéine, plus nombreux, qui sont protonés et relativement non réactifs. Nous recommandons de réduire tous les ponts disulfures à ce stade, en utilisant un agent réducteur en excès molaire (10X), comme DTT ou TCEP. L’excès de DTT doit être retiré par dialyse et la modification subséquente du groupe thiol doit être menée en l’absence d’oxygène pour prévenir la reformation des ponts disulfures ; ces précautions ne sont pas nécessaires lorsque le TCEP est utilisé avant la conjugaison de le maléimide.

La molécule d’Alexa Fluor™ maléimide est typiquement dissoute dans du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité à une concentration de 1 à 10 mM immédiatement avant emploi ; les solutions de réserve doivent être conservées à l’abri de la lumière autant que possible. Généralement, cette solution de réserve est ajoutée à la solution de protéines au goutte à goutte, en agitant, pour produire environ 10 à 20 moles de réactif par mole de protéine ; la réaction se déroule à température ambiante pendant 2 heures ou à 4°C la nuit, à l’abri de la lumière. Tout réactif qui n’a pas réagi avec le groupe thiol peut être consommé en ajoutant un excès de glutathion, mercaptoéthanol, ou d’autres molécules solubles de faible poids moléculaire dotées d’une fonction thiol.

Purification de conjugué
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (A33086)
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 20 à 50 μg (A33087)
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 50 à 100 μg (A33088)

En savoir plus sur le marquage des protéines et des anticorps
Nous proposons une large sélection de kits de marquage d’anticorps et de protéines Molecular Probes™ pour convenir à votre produit de départ et à votre configuration expérimentale. Consultez nos kits de marquage d’anticorps ou utilisez notre outil de sélection de chimie de marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits de marquage, lisez Kits pour le marquage de protéines et d’acides nucléiques—, section 1.2 dans le manuel Molecular Probes™.

Nous vous préparerons un conjugué sur mesure
Si vous ne trouvez pas ce que vous cherchez dans notre catalogue en ligne, nous vous préparerons un conjugué d’anticorps ou de protéines sur mesure. Notre service de conjugaison personnalisé est efficace et confidentiel, et nous croyons en la qualité de notre travail. Nous sommes certifiés ISO 9001:2000.