Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 488 TFP ester

Description

Les colorants Alexa Fluor™ sont des molécules réactives qui peuvent être utilisées pour ajouter une étiquette fluorescente aux amines primaires (R-NH2) des protéines, des oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Les conjugués Alexa Fluor™ résultants présentent une fluorescence plus lumineuse et une photostabilité plus élevée que les conjugués d’autres fluorophores similaires sur le plan spectral. L’ester de TFP Alexa Fluor™ 488 produit un conjugué avec excitation/émission de 495/515 nm qui est spectralement similaire aux conjugués fluorescéine (FITC) et Cy2.

Les colorants Alexa Fluor™ sont disponibles avec les émissions de fluorescence qui couvrent le spectre visible et proche infrarouge (voir la note 1.1 de la gamme de colorants Alexa Fluor™ — dans le manuel Molecular Probes™ Handbook) et fournissent la combinaison unique de solubilité dans l’eau et d’insensibilité au pH entre pH 4 et 10 pour la compatibilité dans divers environnements biologiques.

Les esters de TFP (tétrafluorophényl) sont une amélioration par rapport à la chimie de l’ester succinimidyle (SE ou NHS-ester) généralement utilisée pour attacher des fluorophores ou des haptènes aux amines primaires des biomolécules. Les deux chimies réactives produisent la même forte liaison amide entre le colorant ou l’haptène et le composé d’intérêt, mais les esters de TFP sont moins sensibles à l’hydrolyse spontanée pendant les réactions de conjugaison. Les esters de PTF Alexa Fluor™ sont stables pendant plusieurs heures au pH de base généralement utilisé pour – les esters de succinimidyle de longue durée de réaction.

Réaction de conjugaison typique
Vous pouvez conjuguer des réactifs réactifs réactifs réactifs amine-réactifs avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide ; le protocole fourni est optimisé pour les anticorps IgG. Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif réactif aux protéines.

L’ester de TFP Alexa Fluor™ est généralement dissous dans du diméthylsulfoxyde anhydre (DMSO) de haute qualité (D12345) et la réaction est réalisée dans un tampon de bicarbonate de sodium 0,1 – 0,2 M, pH 8,3, à température ambiante pendant 1 heure. Comme le pKa de l’amine terminal est inférieur à celui du groupe epsilon-amino de lysine, vous pouvez obtenir un marquage plus sélectif du terminus d’amine en utilisant un tampon plus proche du pH neutre.

Purification conjuguée
Les anticorps marqués sont généralement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, telle que Sephadex™ G-25, Biogel™ P-30 ou équivalent. Pour les protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel avec un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse.

En savoir plus sur l’étiquetage des protéines et des anticorps
Nous proposons une large sélection de kits de marquage des anticorps et des protéines Molecular Probes™ pour s’adapter à votre matériau de départ et à votre configuration expérimentale. Consultez Marquage d’anticorps de A à Z ou utilisez notre Outil de sélection de chimie de marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits de marquage, consultez la section 1.2 Kits pour le marquage des protéines et des acides nucléiques.—du manuel The Molecular Probes™,

Nous préparons un conjugué sur mesure pour vous
Si vous ne trouvez pas ce que vous cherchez dans notre catalogue en ligne, nous préparons pour vous un anticorps personnalisé ou un conjugué protéique. Notre service de conjugaison personnalisé est efficace et confidentiel et nous sommes certifiés ISO 9001:2000.