Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 405 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Description

L’Alexa Fluor™ 405 est un colorant fluorescent bleu dont l’utilisation est optimale avec le laser violet de 405 nm. Utilisé pour une génération de signal stable en imagerie et en cytométrie de flux, le colorant Alexa Fluor™ 405 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. En plus de formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant Alexa Fluor™ 405 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules.

L’ester NHS (ou ester succinimidylique) de l’Alexa Fluor™ 405 est l’outil le plus populaire pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH2) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Le conjugué Alexa Fluor™ résultant présentera une fluorescence plus lumineuse et une photostabilité plus élevée que les conjugués d’autres fluorophores similaires sur le plan spectral.

Informations détaillées concernant l’ester NHS d’AlexaFluor™ :

Étiquette fluorophore : Colorant Alexa Fluor™ 405
Groupe de réactifs : esters NHS
Réactivité : Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
Ex/Em du conjugué : 400/424 nm
Coefficient d’extinction : 35 000 cm-1M-1
Colorants similaires sur le plan spectral : bleu pacifique
Poids moléculaire : 1028,3

Réaction de conjugaison typique
Vous pouvez conjuguer des réactifs amino-réactifs avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.

L’ester NHS Alexa Fluor™ est typiquement dissous dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité (D12345), et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1 à 0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.

Purification des conjugués Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :

• Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 0,5 à 1 mg
• Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 20 à 50 µg
• Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 50 à 100 µg

En savoir plus sur le marquage de protéines et d’anticorps
Nous offrons une large sélection de kits de marquage d’anticorps et de protéines Molecular Probes pour convenir à votre produit de départ et à votre configuration expérimentale.

Nous préparerons un conjugué d’anticorps ou de protéines sur mesure
Si vous ne trouvez pas ce que vous cherchez dans notre catalogue en ligne, nous préparerons un conjugué d’anticorps ou de protéines sur mesure pour vous. Notre service de conjugaison personnalisé est efficace et confidentiel, et nous croyons en la qualité de notre travail. Nous sommes certifiés ISO 9001:2000.